(1)稀释
①以无菌操作将检样25g(mL)放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1: 10的均匀稀释液。
②用lmL灭菌吸管吸取1: 10稀释液lmL,注入含有9mL灭菌生理盐永或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1: 100的稀释液。
③另取lmL灭菌吸管，按上条操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支lmL灭菌吸管。
④根据对检样污染情况的估计，一般选择三个稀释度，每个稀释度接种三管。
⑤乳糖发酵试验
将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，每一稀释度接种三管，置36°C士q#°C培养箱内，培养24h±2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告大肠菌群阴性，如有产气者则继续做以下实验。
(2)分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36°c±rc培养箱内培养18～24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰染色和证实试验。
(3)证实试验在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行革兰染色，同时接种乳糖发酵管，置36°C士1°C培养箱内培养24h±2h，观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。
(4)报告根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值。
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